Nina Käppel Immunoassay-Optimierung für verschiedene Probenmatrices 2008. 132 Seiten. Preis 35,00 Euro. Zahlreiche Abbildungen, davon 40 in Farbe. Broschur. ISBN 978-3-938807-72-9. Rhombos-Verlag. Immunoassays sind heute kaum noch aus bioanalytischen und biochemischen Laboratorien wegzudenken. Sie werden für die Forschung, die Lebensmitelüberwachung, das Umweltmonitoring und vor allem für medizinische Fragestellungen entwickelt und eingesetzt. Sie sind relativ einfach durchführbar, in der quantitativen und qualitativen Aussage effektiv und in der Regel sehr spezifisch. Diese Spezifität lässt sich auf den Einsatz von Antikörpern oder anderen Erkennungsstrukturen zurückführen, die hochspezifisch ein spezielles Antigen in der Probe binden. In der Praxis trifft man bei der Entwicklung und Durchführung vom Immunoassays jedoch auf verschiedene Herausforderungen, die in der vorliegenden Arbeit nachvollzogen und speziell im Hinblick auf unterschiedliche Probenmatrices und die Anforderungen, die diese an das Assaydesign stellen, beleuchtet werden. Es wurden Immunoassays in verschiedenen Probenmatrices entwickelt, die aktuelle Problemstellungen erfassen. So wurde für die Probenmatrix Wasser ein Multianalyt-Assay für verschiedene endokrin wirksame Substanzen entwickelt, in Milch wurde das Hormon Progesteron untersucht, um den Sexualzyklus einer Milchkuh zu Charakterisieren und in Serum wurden Immunoassays zum Nachweis verschiedener Parameter aus der Human- und Veterinärdiagnostik bearbeitet. Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung 9 2 Theoretischer Teil 13 2.1 Biochemische Grundlagen 13 2.1.1 Biologische Erkennungssysteme: Antikörper 13 2.1.2 Biologische Erkennungssysteme: Aptamere 18 2.1.3 Prinzip des Immunoassays 19 2.1.4 Matrixeffekte 23 2.1.5 Probenmatrix: Wasser 24 2.1.6 Probenmatrix: Lebensmittel (Milch) 25 2.1.7 Probenmatrix: Serum & Plasma 28 2.2 Optische Spektroskopie 32 2.2.1 Spektroskopische Grundlagen 32 2.2.2 Reflexion und Brechung von Licht 33 2.2.3 TIRF - Fluoreszenzanregung mit interner Totalreflexion 35 2.2.4 RIfS - Reflektometrische Interferenz-Spektroskopie 36 3 Materialien und Methoden 39 3.1 Verbrauchsmaterialien 39 3.1.1 Analyte, Derivate und Antikörper 39 3.1.2 Chemikalien 41 3.1.3 Lösungen 44 3.2 Methoden 45 3.2.1 Oberflächenchemie 45 3.2.2 Fluoreszenzmarkierung der Antikörper 47 3.2.3 Bindungshemmtest 47 3.2.4 Sandwich-Immunoassay 49 3.2.5 Messungen mit dem TIRF-Sensor und Datenauswertung 50 3.2.6 Messungen mit dem RIfS-Sensor und Datenauswertung 53 3.2.7 UV-Spektroskopie 54 3.2.8 Rasterkraftmikroskopie (AFM) 55 3.2.9 Ellipsometrie 55 3.2.10 Top-Spot 56 4 Ergebnisse und Diskussion 57 4.1 Assayoptimierung anhand eines Modell-Assays für verschiedene Probenmatrices 57 4.1.1 Charakterisierung der verwendeten Progesteron-Antikörper 57 4.1.2 Charakterisierung der Sensoroberfläche 59 4.1.3 Untersuchungen in der Probenmatrix Wasser 62 4.1.4 Untersuchungen in der Probenmatrix Milch 64 4.1.5 Untersuchungen in der Probenmatrix Serum 67 4.1.6 Vergleich der unterschiedlichen Matrices 69 4.2 Anwendungsbeispiele aus dem Bereich der Wasseranalytik 72 4.3 Anwendungsbeispiele aus dem Bereich der Lebensmittelanalytik 76 4.4 Anwendungsbeispiele aus dem Bereich der Humandiagnostik 78 4.4.1 Untersuchungen zum C-Reaktiven Protein 79 4.4.2 Untersuchungen zum Myoglobin 91 4.4.3 Untersuchungen zum Procalcitonin 94 4.4.4 Untersuchungen zum Prostata-spezifischen Antigen 97 4.5 Anwendungsbeispiele aus dem Bereich der Veterinärdiagnostik 103 5 Zusammenfassung und Ausblick 107 6 Literaturverzeichnis 111 7 Abbildungsverzeichnis 119 8 Tabellenverzeichnis 124 9 Anhang 125 9.1 Abkürzungen 125 9.2 Assaybedingungen 127 9.3 Akademische Lehrer 133weiterlesen